بهینه سازی خلوص فاکتور ix انعقادی با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی هپارین و مقایسه آن با کروماتوگرافی تعویض یونی

چکیدهسابقه و هدف بیماری هموفیلی b ، به علت کاهش یا عدم وجود فاکتور ix انعقادی می باشد. روش درمان انتخابی برای این بیمـاران، استفـاده از فاکتـور ix است که تا حـد امکـان خالص شـده باشد، لذا محققین درصـدد تفکیک و خالص سازی پروتئین های پلاسمایی برآمده اند. از روش های رایج جهت تخلیص فاکتور ix می توان استفاده از کروماتوگرافی تعویض یونی را نام برد. ولی از دو دهه قبل به تدریج کروماتوگرافی تمایلی نیز به کار گرفته شده است.هدف از این تحقیق در مرحله اول یافتن میزان خالص سازی فاکتور ix با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی هپارین (به عنوان روش تکمیلی) و سپس مقایسه آن با سیستم کروماتوگرافی تعویض یونی با استفاده از deae بوده است. مواد و روش هامطالعـه انجـام شده از نـوع تجربـی بود. به منظـور تهیه فاکتـورix انعقـادی از ستون xk-16 و ژل هــای deae- سفاروز و هپارین- سفاروز استفاده گردید. برای اندازه گیری فعالیت انعقادی، کیت پلاسمایی فاقد فاکتور ix و برای اندازه گیری میزان آنتی ژن، کیت الیزا مورد استفاده قرارگرفت.یافته ها فعالیت ویژه فاکتور ix و در نهایت میزان خالص سازی آن نسبت به پلاسما در کلیه مراحل کار مشخص گردید که با اضافه شدن یک مرحله کروماتوگرافی تمایلی (هپارین- سفاروز) به روش تهیه فاکتور ix، میزان فعالیت ویژه فاکتور ix از iu/mg 1/3 به iu/mg 29 افزایش یافت و میزان خلوص آن در مقایسه با پلاسما حدود1450 برابر شد. درحالی که در استفاده تنها از کروماتوگرافی تعویض یونی (deae- سفاروز)، خلوص فاکتور ix حدود 155 برابر پلاسما می باشد.نتیجه گیری نتایج این بررسی نشان می دهد که اضافه نمودن یک مرحله کروماتوگرافی تمایلی با استفاده از هپارین، در افزایش درجه خلوص و فعالیت ویژه این پروتئین پلاسمایی نقش چشمگیری داشته است.کلمات کلیدی: کروماتوگرافی تمایلی هپارین، فاکتور ix انعقادی، هموفیلی b، کروماتوگرافی تعویض یونی